Рад, что понравилось)

Спасибо!)

Благодарю за отзыв! Вы предлагаете интересную тему, хотя сам я пользуюсь этим методом довольно ограниченно. Но буду иметь ввиду.

@@roman.s.ovchinnikov Спасибо. Вы больше специализируетесь в клинической микробиологии?

@@aigulaigul6837 Да, конечно. Микробиологическая диагностика.

@@aigulaigul6837 Да, именно так.

Тоже хотелось бы про мембранную фильтрацию!)))

Спасибо за отзыв и за ваш опыт! Я так чувствую, вы выделяете грибы из внешней среды и из подобных объектов? Не из клинических образцов?

@@roman.s.ovchinnikov Верно, из природных биотопов для фундаментальных исследований структуры или биоразнообразия, с точки зрения биотехнологической значимости. Либо работаю с уже выделенными штаммами из ВКМ.

@@stuurman8179 Класс, очень интересная область! У меня же в основном клиническая микология, патогенные грибы. Но например была работа по микробиому комаров, несколько интересных видов получили. Сейчас делаем пробы из водоемов (Байкал, Ангара).

@@roman.s.ovchinnikov Ну, дрожжи и грибы многие вообще считаются условно-патогенными, те же албиканс, парапсилозис и тропикалис с которыми я работал не проявляли патогенных свойств, в ATCC 4 группа(по-моему). Работа по перестройке клеточной стенки при нефтедеструкции. Но вот если инокулят литрами пить или вмазывать в слизистые- думаю тут все плохо закончится. ЗЫ когда комар кусает, обидно не за укус, а за то, что он, зараза, только-что впрыснул в тебя микробиом слюны и ротового аппарата =)

@@stuurman8179 И кстати дрожжи в микробиоме комара тоже присутствуют). А вы значит тестировали патогенность дрожжей? Каким методом, коллега?

Увы, не знаю состав среды для орхидей) и нужна ли там стерильность..

Иван, среда на плитке не с целью стерилизации! Это подготовительная операция, чтоб растворить компоненты. А потом ее будем стерилизовать, во второй части видео. А это Часть 1!)

@@roman.s.ovchinnikov а она не успеет затвердеть пока вы будете её стерилизовать?

@@user-qv5kx6el1s , встречайте вторую часть видео! Там мы автоклавируем среду, ДО затвердевания! Но даже если затвердеет, а автоклаве она опять расплавиться.

Извините, но это слишком большое задание для меня))

Не очень понял первую часть вопроса. Навеска агара была 15 г. Это довольно стандартное количество агара - 15 г на литр, применяется во многих средах.

@@roman.s.ovchinnikov Спасибо, в первой части вопроса имел ввиду какая кислотность должна быть пригодной (какая норма в пределах от 6,5 до 7 ph?, а если выше или ниже уже то тогда нужно балансировать PH в пределя от 6,5-7 ?)

@@jjdf136 Все значения от 6,5 до 7,0 - это норма. Если выше или ниже - надо корректировать.

@@roman.s.ovchinnikov Спасибо понятно.

Не желательно т.к. могут быть примеси, лучше все реактивы использовать с меткой ЧДА или ХЧ

@@Guzal_kamalova Всё верно, для приготовления сред берут лабораторные стандартизованные реагенты. Иначе ее ростовые свойства могут измениться.

Конструктивные вопросы. рН вижу смысл измерять уже в смеси. По поводу инструкции на банке и авторских прав не вижу связи. Изготовитель специально для нас пишет эту инструкцию. Про добавление глюкозы возможно вы и правы. Но почему так рекомендуют, вам не сказали?

@@roman.s.ovchinnikov 1.По поводу рН воды. У нас аквадистилляторы проходятплановую поверку, чистку регулярно и рН воды мы измеряем для того, чтобы проверить текущую работу (если можно так выразиться) дистиллятора. И тем более есть ГОСТ по воде - 6709-72, где написано, что рН воды должно быть от 5 до 7 и если результат не в этих границах, то проводятся корректирующие действия - внеплановая проверка дистиллятора. Ведь питательные среды - основа всего, от них зависит ход исследования и важен каждый момент. А среды делаются из дистиллированной воды, поэтому мы и ее проверяем и журнал ведём. 2.По поводу авторских прав. Я работаю в отделе приготовления питательных сред и у нас есть журнал, где мы прописываем когда, сколько и что мы приготовили (по заявкам на среды от других специалистов, которые работают в заразной зоне). И когда возникает вопрос о сборных средах, то коллеги всегда приносят рецепт из МУКа или ГОСТа, с которым работают (например, ГОСТ на исследование молочной продукции, им оттуда нужна сборная среда - любая, они распечатывают рецепт на нужную среду по установленной у нас форме и приносят) и мы в журнале прописываем откуда взяли рецепт (номер ГОСТа или МУКа). Просто, когда я пришла, мне рассказывали историю, что как то приготовили среду сборную по рецепту по банке от производителя, в журнале не прописали откуда рецепт, потом комиссия пришла, были разбирательства по этому поводу долготе. Вопрос был в том, что производитель выдержал свою методику приготовления среды, все сам посчитал, выдал паспорт соответствия (качества), а мы просто "переписали" все это, хотя права не имели. И как сказала комиссия: для сборных сред есть нормативные документы, которыми имеют право пользоваться все и ссылаться тоже. А производителей много, у каждого своя технология производства. Приведу пример по поводу срока хранения сред. Например, среда эндо. От ФБУН г. Оболенск готовая среда используется в день приготовления, а от ООО Биотехновация 5 дней, то есть два разных производителя, две разные методики производства, а мы просто взяли и переписали состав, приготовили, не зная всей сути. 3.По поводу глюкозы. Самой интересен этот момент. Пыталась найти информацию сама. Но как мне объясняли, что нельзя растворять глюкозу в горячей воде, потому что это повлияет на качество среды в худшую сторону и ход исследования будет неверным (скорее, результаты будут недостоверными)

@@roman.s.ovchinnikov И ещё хочу немного дополнить. Некоторые среды мы готовим в термостойких колбах с ватно-марлевыми крышками, завернутыми в бумагу, так как некоторые среды не автоклавируется, например,селенитовый бульон. Мы в колбе его приготовили и над спиртовкой в ламинаре его различаем.

@@user-zm2qm5ih3j да, в приготовлении сред много нюансов. В этом видео я говорю о базовых вещах.

@@user-zm2qm5ih3j спасибо за подробный комментарий. Вы явно работаете в испытательной лаборатории, поэтому у вас всё так дотошно. В других лабораториях в основном делают среды по инструкциям производителя без дополнительных заморочек

Приборы стерильными не могут быть в средоварочной, там нет такой необходимости,все приборы должны быть чистыми и в рабочем состоянии( проводить каждое утро калибровку) ,можно поверхности столов и приборов протирать этиловым спиртом 70 % или другими дезинфектантами для обработки поверхностей

Эти приборы не могут и не должны быть стерильными! Ибо готовят среду в нестерильных условиях, а потом стерилизуют (автоклавируют).

Нет. Количество агара берется по прописи конкретной среды. В данном случае 15 г на 1 л.

Воду разогревают по двум причинам. 1. В инструкции написано - прогреть до кипения для полного растворения. Значит надо прогревать. 2. Если этого не делать, несмотря на автоклавирование среда не будет однородной. В застывшем флаконе будут видны слои, это личный опыт. В итоге, надо прогревать. рН действительно надо измерять после автоклавирования то же.

Среда довольно универсальна,хотя она ориентирована на рост грибов,на ней многие бактерии также неплохо растут,если добавить хлорамфеникол - рост бактерий будут подавляться . Тогда на этой среде будут расти только грибы.

И опять Гузаль за меня всё верно ответила. Сабуро предназначена для грибов, но могут вырасти и бактерии. Обычно ее используют с добавлением хлорамфеникола, чтоб росли только грибы. Она широко используется для микологических анализов.

Мы на ней выращиваем дрожжи, плесень и грибы

Используют соляную кислоту для понижения рН,а для поднятия едкий натрий 0,1 М

Все верно ответила Гузаль - HCl и NaOH определенных концентраций.

@@roman.s.ovchinnikov кальций (мел) допустимо использовать для регуляции PH ?

@@maxon9832 Не надо самодеятельности при приготовлении питательных сред, я считаю.

@@maxon9832 Среда 10. Для выделения культур Clostridium, (г/л): КН2РО4 - 0,5, К2НРО4 - 0,5, MgS04 - 0,5, NaCl - 0,5, вода водопроводная, глюкоза - 20, пептон - 5, CaCO3 - 10, рН - 7,0. studfile.net/preview/5244850/page:17/ === Мел вешанке добавляют.

Можно сделать желатиновую среду. Но на ней мало кто сможет расти. Не все микробы способны гидролизовать желатин как единственный источник белка.

Желатин "плывёт" при нужных для роста температурах.

Если есть дистиллированная вода,то используйте ее. Кипяченая вода не желательна,т.к. она не достаточна чистая(в смысле минералы не все в осадок выпадают)

Как уже говорилось, вода из-под крана, пускай и кипяченая, будет влиять на минеральный состав среды.

В большинство сред добавляется 10-15 грамм агара

@@roman.s.ovchinnikov спасибо👍

Да, конечно. Чтобы не загрязнять компоненты в банках.

Обычно применяют агар, хороших аналогов я не могу назвать. Есть желатиновые среды, но это другое.

Нет. Посмотрите среды лидеров мирового рынка, уж у них-то есть все возможности, но используют агар-агар. (Желатиновая среда это отдельный тест, в качестве основы не пойдёт)

Домой никакой автоклав покупать не советую. Это прибор повышенной опасности.

@@roman.s.ovchinnikov я уже купил на 26 литров для заготовки банок с тушенкой

его качество сборки и сварные швы оставляют желать лучшего(

@@Dimgames Видимо бытовой, типа скороварки? Я говорил про профессиональные аппараты, их домой лучше не надо)

@@Dimgames это плохо. Высокое давление - не шутки.

Если в рецепте среды написано пептон - значит надо использовать только пептон. В основном пептон мясной, из казеина молока, но бывает и рыбный. Есть растительный аналог пептона, из соевого белка.

@@roman.s.ovchinnikov а можно пептон сделать в ручную из мяса,и с минимальными затратами?

@@roman.s.ovchinnikov а то в моем городке пептона нет,а доставка по почте дело сомнительное!

@@Alex-cs2ws Некоторые среды готовят на мясном бульоне, там надо просто сварить мясо. Можете поискать подробнее информацию в инете, типа "мясной агар"

@@Alex-cs2ws Пептон сухой, хранится долго, при пересылке по почте ничего с ним не случится (скорее всего)

Пустые флаконы до разливки стерилизовать не надо! Всё и так простерилизуется при автоклавировании среды.

@@roman.s.ovchinnikov спасибо))

@@roman.s.ovchinnikov работала в семи лабораториях и нигде не использовали для сред нестерильную посуду, кроме особо оговоренных в прописях случаев.

@@zaibusinka Перед автоклавированием разливали среды в стерильную посуду? Смысл? Основания какие? Двойная работа.

@@roman.s.ovchinnikov по моим гостам и му стерилизация посуды 30 минут 121°C, стерилизация сред 12-15 минут 121°C. Т.е. при автоклавировании сред условия стерилизации посуды не выполняются

Как конкретно называется среда? Какая пропись?

@@roman.s.ovchinnikov ух, я и не думал что дождусь ответа. Попозже найду патент, и там есть описание на каких средах делали. Скину ссылку.

@@roman.s.ovchinnikov Добрый день. Вот здесь есть описание на каких средах делали и где лучше результат edrid.ru/rid/216.013.6d56.html И у меня вопрос: каким простым путём можно приготовить пит.среду(в жидком виде) и размножить эту бактерию? Помогите пожалуйста.

@@Minivan4444 При всем уважении у меня нет возможности это всё прочитать. Пришлите конкретную пропись. При приготовлении любой среды главное - ее грамотно простерилизовать.

@@roman.s.ovchinnikov ок, перепишу все среды на которых проводили испытания. Но одну среду помню: мясопептонная.

Обычно в бактериальные среды не добавляют ничего, подавляющего грибы. Потому что бактерии растут гораздо быстрее бактерий, им грибы особо не страшны. А вот в грибные среды добавляют антибактериальные компоненты, хлорамфеникол например.

@@roman.s.ovchinnikov Благодарю . Можно у бактерий выработать резистентность искусственно , добавив в чашку петри несколько кусочков антибиотиков ? Нужно было на лаборанта идти , люблю я эти все дела .

@@SERGEYFT думаю, в принципе это возможно. Но я такими опытами не занимался.

У вас есть личный опыт применения таких колб? Если вы уверены, что они имеют преимущества, то благодарю вас за эту ремарку.

Растворимость видна в любой посуде - после минут трёх несильного кипения раствор становится прозрачным и прекрасно видно что осталось нерастворенным или пригоревшим. По своему опыту могу сказать, что нерастворяются только изначально не размешанные комочки при очень быстром нагреве.

@@zaibusinka кастрюля это не лабораторная посуда

@@Elena_ua в богатой лаборатории работаете, раз не приходится ничего изобретать )))

Услышал вас

Мой канал в основном для микробиологов. Действительно, не для обывателей)

Ок, услышал)) А если мы каждый раз будем высыпать в мусор остатки, никаких сред и реагентов не напасешься)